海参肠中溶菌酶的别离纯化及其酶学性质

  G275凝胶过滤层析分步纯化 ,得到电泳纯的溶菌酶 。该酶的比生机到达 3 026. 1 U/ mg ,纯化倍数为

  18. 7 ,生机收回为 46. 0 %。对纯化的溶菌酶性质研讨标明 ,该酶相对分子质量约为 16 000 ,对溶壁微球

  2. 1 溶菌酶的别离纯化 CP E 浓缩溶菌酶经 CM52 纤维素阳离子交

  换柱层析别离后 ,盐洗脱峰为活性峰 ,洗脱曲线 。搜集有活性的洗脱液脱盐浓缩后 ,上样于 Sep hadex G275 凝胶过滤层析柱 ,洗脱曲线 。搜集活性峰透析浓缩后作为纯化样品运用 。 整个别离进程的纯化成果见表 1 。由表 1 可知 , 纯化进程中阳离子交流柱层析纯化效果最为明 显 ,纯度提高了 11. 3 倍 ,去除了大部分杂蛋白 ,最 终溶菌酶经纯化比活到达 3 026. 1 U/ mg ,纯度提 高了 18. 7 倍 ,生机收回为 46. 0 %。

  展了一系列新式溶菌酶的开发研讨工作[5] 。海洋 极点生物作为产酶资源正成为一个新的研讨热 点 。因为海洋的特别环境 ,使海洋生物所发生的 酶具有一些较之相应的陆生动植物及微生物发生 的酶更为共同的性质 。本文作者提取了海参消化 道中的溶菌酶 ,并对提取条件和酶学性质进行了 深化的讨论 。本研讨对海参溶菌酶的出产及使用 具有极端严重的含义 。

  见金属离子和化学试剂有杰出的配伍性 。与一般从蛋清中提取的溶菌酶相比较 ,从海参中别离纯化的

  溶菌酶具有广谱灭菌功用 ,即对常见的革兰氏阴性菌和阳性菌细胞壁均有溶解效果 。

  海参冷冻肠 ,大连獐子岛渔业集团股份有限 公司供给 。 1. 1. 2 试剂与首要仪器

  2. 3. 2 溶菌酶的稳定性 选用不一样 p H 和温度测定溶菌酶的稳定性 ,

  2. 2 溶菌酶相对分子质量的测定 将纯化得到的溶菌酶以 SDS2PA GE 进行分

  析 ,成果如图 3 所示 ,纯化样品为单一条带 。由标 准蛋白可知该酶相对分子质量约为 15 962 。

  在不同 p H 缓冲溶液中和不一样的温度下测定相 对酶活 ,成果见图 4 、5 。可知 ,该溶菌酶最适效果 条件为 :p H 6. 5 ,35 ℃。在高于和低于 35 ℃时酶 活下降比较缓慢 ,5 ℃时仍坚持必定活性 ,相对酶 活为 25 %。依据 Margsin 等的界说 ,一般把最适 催化温度在 30 ℃左右、在 0 ℃左右仍有必定催化效 率的酶称为低温酶 。因而该溶菌酶为低温酶[728] 。

  摘要 : 从海参肠中别离纯化溶菌酶 ,并测定其酶学性质及抑菌效果 。在 4 ℃下将海参肠打浆 ,用 Tris2

  溶菌酶 ,又称细胞壁水解酶 ,专门效果于细菌 细胞壁的骨架物质2肽聚糖 ,广泛存在于高级动植 物安排及分泌物 、原生动物 、昆虫和各种微生物 中[1] 。溶菌酶自身是一种蛋白质 ,安全功能高 ,在 食物 、医药 、生物等范畴使用广泛[224] 。

  一般产品溶菌酶多由蛋清中提取 ,仅对革兰 氏阳性菌有效果 。为此 , 数十年来国内外相继开