Aegis溶菌酶的抑菌效果及抑菌机理开始研讨pdf

  新 试 验 Aegis溶菌酶的抑菌效果 及抑菌机理开始研讨 杭州康源饲料科技有限公司/卢亚萍 潘宏涛 挑选一些革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌，研讨Aegis溶菌酶对细菌的敏感性。依据成果得出，Aegis溶菌酶 摘 要： 对实验菌株都有不同程度的按捺或许杀灭效果，特别对一些临床别离的致病菌及饲养过程中损害较大的菌珠效果明 显。Aegis溶菌酶对实验菌株的成长繁衍和代谢均有影响，其对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的效果效果不同，推 测其效果机理与其二者的细胞壁的结构不同有关。 关键词：Aegis 溶菌酶；抑菌效果；药敏；抑菌机理 溶菌酶（Lysozyme）又称胞壁质 1 资料与办法 Aegis溶菌酶由杭州康源饲料 酶，最大的效果于肽聚糖分子的N-乙 科技有限公司，杭州伊杰斯生物科 酰胞壁酸（NAM）与乙酰葡萄糖氨 1.1 实验菌株 技有限公司供给。养分肉汤培育基 （NAG）之间的 β－1,4 糖苷键，使 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 及养分琼脂培育基按惯例办法制造。 细菌细胞壁松懈，失掉对细胞的维护 无乳链球菌、停乳链球菌、链 1.3 实验办法 效果，最终导致细胞溶解逝世。微生 球菌、化脓棒状杆菌、沙门氏菌、 1.3.1 菌液制备 物产生的溶菌酶经过几种相关的酶 肺炎球菌、布氏杆菌、结核分枝杆 运用前，将菌株接种在琼脂平 的混合物，因为彼此之间的协同效果 菌、魏氏梭菌、肉毒梭菌、水肿梭菌、 板上，37℃培育 24h。挑选典型菌 使其对细胞壁的溶菌才能增强。 气肿疽梭菌、破伤风梭菌、气肿疽 落接种于一般肉汤培育液中，37℃ 溶菌酶自身是一种蛋白质，安 梭菌、鼻疽杆菌、多杀性巴氏杆菌 培育 16h。取出，以平板培育计数 全功能高，在食物、医药、生物学中 均由我国生物制品判定所供给；金 法测定其成长浊度单位。菌液临用 得到了广泛使用。现在市场上溶菌酶 黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大 5 前用无菌水稀释为10 个菌/ml。 多由蛋清中提取，仅对革兰阳性菌有 肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、宋内志 1.3.2 Aegis溶菌酶最小抑菌浓度 效果，约束了其使用场景规模。近年来国 贺菌、溶血葡萄球菌，支气管德特菌、 （MIC）的测定 表里对多种来历的溶菌酶进行了广 暗沟肠杆菌等常见致病株由杭州市 选用试管两倍稀释，血平皿培 泛的研讨，但对溶菌酶效果机理未进 第六人民医院供给；猪大肠埃希菌 养法，每排放无菌带塞试管13支， 行具体的研讨，相关签到很少。本试 M1，猪大肠埃希菌 M2，猪沙门氏 对应血平皿13个。每管加1ml用无 验研讨了Aegis 溶菌酶对规范菌株、 菌 R1，鸡大肠埃希菌 A1，鸡大肠 菌水稀释往后的菌液，将药液 1ml 临床别离致病菌及饲养中常见致病 埃希菌 A2，鸡沙门氏菌 X 等常见致 参加到第一管中，充沛摇匀后取 菌的抑菌效果，并以常见的大肠埃希 病株由浙江大学防备兽医研讨实验 1ml参加到第二管中，混匀后取1ml 菌和金黄色葡萄球菌为实验目标，对 室供给；嗜水气单胞菌、爱德华氏 到第三管中，管中留下的 1ml 菌、 Aegis 溶菌酶的抑菌机理进行了开始 菌等水产常见致病株由上海水产研 药混合液取 0.1ml 滴入到对应血平 评论，为Aegis溶菌酶的使用供给理 究所供给。 皿中培育。依此类推。一起建立两 论依据。 1.2 实验试剂 组对照：（1）菌液对照不加任何药物； 2007.12 NEW FEED 15 NEW FEED 新 试 验 （2）培育基对照，培育基不接种菌液， 杀灭效果。Aegis溶菌酶对不同菌株 显微镜下活体调查未加Aegis溶菌 不加药物。做无菌查验。一切处理 的抑菌效果也是存在必定的差异的。 酶的大肠埃希菌为杆状，形状完好， 样品均 35℃培育 24h，调查成果。 2.2 Aegis溶菌酶对大肠埃希菌及 运动；金黄色葡萄球菌为椭圆形， 培育后，当培育物呈现菌斑，对照 金黄色葡萄球菌菌落构成的影响 形状完好，单个或成对呈现。增加 培育基澄明无菌斑时，记载产生菌 肉眼调查未增加Aegis 溶菌酶 Aegis溶菌酶的大肠埃希菌形状不均 斑的平皿数。将前一支澄明试管吸 的大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌菌 一，运动较慢且有部分菌体粘连； 取 0.1ml 滴入琼脂平皿上，进一步 落为圆形不凸出，形状规矩，菌落 金黄色葡萄球菌为圆形，但菌体较 确证最终得出药物该细菌 MIC 值。 边际润滑；而增加了Aegis溶菌酶 大，约为正常菌体的两倍。 实验重复3次。 的菌落为油煎蛋形凸出，菌落边际 3 评论 1.3.3 Aegis溶菌酶最小灭菌浓度 不润滑，菌落形状差异很大。相差 （MBC）的测定 选用平板倾泻法，顺次将未见 表1 Aegis溶菌酶对常见规范菌株的抑菌效果 菌成长的各管培育物各汲取 0.1ml 菌种 MIC（ug/ml） MBC（ug/ml） 金黄色葡萄球菌 4.50 8.00 注入无菌平板中，再参加20ml相应 无乳链球菌 0.50 1.25 冷至40℃～45℃的熔化养分琼脂培 停乳链球菌 0.50 1.25 链球菌 0.50 1.25 养基，摇匀待凝。35℃培育 24h， 大肠杆菌 0.50 2.50 平板上的菌落数小于 5 个组所对应 化脓棒状杆菌 1.50 5.60 的Aegis溶菌酶的最低浓度为最小 沙门氏菌 1.00 3.25 肺炎球菌 1.50 5.35 灭菌浓度。 布氏杆菌 2.00 8.80 1.3.4 Aegis溶菌酶对大肠埃希菌和 结核分枝杆菌 5.00 10.45 魏氏梭菌 1.50 3.25 金黄色葡萄球菌菌落构成的影响 肉毒梭菌 0.50 2.35 在增加 MIC 浓度的 Aegis 溶 水肿梭菌 0.50 1.25 破伤风梭菌 5.00 10.05 菌酶养分肉汤管中，别离接种约 气肿疽梭菌 4.50 8.20 为 1×10cfu/ml 的大肠埃希菌和 多杀性巴氏杆菌 1.50 3.25 鼻疽杆菌 2.50 5.50 金黄色葡萄球菌，35℃培育 24h 后，选用划线 Aegis溶菌酶对临床别离菌株的抑菌效果 养分琼脂平板上培育，调查菌落 菌种 MIC（ug/ml） MBC（ug/ml） 金黄色葡萄球菌 6.50 10.00 形状。建立不增加 Aegis 溶菌酶 大肠埃希菌 2.00 3.50 组为阴性对照组。 表皮葡萄球菌 5.00 10.50 肺炎克雷伯菌 0.50 1.25 2 实验成果 宋内志贺菌 0.50 1.00 溶血葡萄球菌 0.50 1.00 2.1 Aegis 的抑菌效果 支气管德特菌 0.50 1.00 暗沟肠杆菌 5.00 10.00 以多种常见规范菌株、临床致 嗜水气单胞菌 5.00 10.00 病菌和饲养常见致病菌作为检测指 表3 Aegis溶菌酶对饲养致病菌株的抑菌效果 示菌，选用倍比稀释法测定 Aegis 菌种 MIC（ug/ml） MBC（ug/ml） 溶菌酶对这些菌株的抑菌及灭菌作 猪大肠埃希菌M1 2.00 4.00 用。成果见表1、表2、表3，Aegis 猪大肠埃希菌M2 2.50 6.50 猪沙门氏菌R1 3.00 5.50 溶菌酶有较宽的抑菌谱，对革兰阴 鸡大肠埃希菌A1 2.50 6.25 性菌、革兰阳性菌都有不同程度的 鸡大肠埃希菌A2 1.50 3.00 鸡沙门氏菌X 6.50 10.00 按捺效果，对临床别离的多种致病 爱德华氏菌 4.50 8.00 菌和饲养中常见致病菌都有较强的 嗜水气单胞菌 5.00 10.00 16 NEW FEED 2007.12 新 试 验 3.1 Aegis溶菌酶作为抗菌药物和 细胞壁为细菌外表很杂乱 酶水解细胞壁中的糖苷键，损坏 饲料增加剂的使用 的结构，可接受细胞内强壮的浸透 了细胞壁结构使细胞壁呈现部分 本研讨依据成果得出，Aegis 溶菌 压而不被损坏。细胞壁主要成分是 缺失，构成了 L 型细菌，失掉了 酶抑菌谱广，对多种革兰阴性菌、革 肽聚糖，细胞壁的机械强度有赖 对细胞的维护效果，细胞质崩溃 兰阳性菌都有显着的按捺效果，对多 于肽聚糖的存在。革兰阳性菌细 呈现空腔；别的一种效果是 Aegis 种鸡蛋清溶菌酶不能直接效果的微 胞壁肽聚糖含量丰厚，有 15 ～ 50 溶菌酶经过浸透进入细胞内，吸 生物如大肠埃希菌等都有溶菌效果。 层，交联率高，构成巩固细密的 附细胞内带有阴离子的细胞质， Aegis溶菌酶自身是一种无毒性安全 三维立体网状结构，细胞壁较厚； 并产生絮凝效果，打乱细胞正常 性很高的抗菌蛋白，能挑选性地分化 革兰阴性菌肽聚糖含量少，只要 的生理活动，然后杀灭细菌。 微生物的细胞壁构成溶菌现象，一起 1 ～ 2 层，交联率低，构成二维的 Aegis 溶菌酶对金黄色葡萄 不损坏其他养分安排而具有灭菌功 平面结构，较革兰阳性菌疏松， 球菌有激烈的按捺效果，并对大 效。Aegis 溶菌酶对多种临床致病菌 细胞壁较薄。革兰阳性菌和革兰 肠埃希菌也有较强的效果，估测 有显着的按捺效果，在饲养业中可添 阴性菌的细胞壁结构明显不同， 其具有内－N,O －二乙酰胞壁质 加到饲料中替代或部分替代抗生素 导致这两类细菌在染色性、抗原 酶活性，能水解金黄色葡萄球菌 对此类致病菌

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