溶菌酶的溶菌效果

  溶菌酶的灭菌机理是其效果于细菌细胞壁的粘肽层，粘肽是细菌的细胞壁主要成分。溶菌酶能堵截粘肽结构中的 N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β- 1,4糖苷键，损坏粘肽支架，使细胞壁损坏。因为细菌细胞壁的重要功用之一是维护细菌，即抗低渗，故细菌失掉细胞壁的维护效果后，在低渗环境中可产生溶解。溶菌酶的最大的效果对象是革兰氏阳性菌。革兰氏阴性细菌细胞壁粘肽层外还有脂多糖、外膜和脂蛋白结构，故在正常的情况下溶菌酶不易发挥直接做用。 溶壁微球菌（ M.Lysodeikticus）：本菌是由空气中别离出的一种革兰氏阳性菌，对人不致病，菌落黄色，一般琼脂培育基成长杰出，每月传代一次或冻干保存，用于制备溶壁微球菌琼脂平板。 规范溶菌酶：称取溶菌酶规范纯品，用 1/15mol.L -1 PBS配制为1000ug/ml原液，并稀释为100、50、10 ug/ml规范液，用前保存在冰箱中；用于阳性对照及制备规范曲线; 唾液：用无菌平皿搜集唾液，可在同学间搜集。 其它：无菌打孔器（孔径 2mm），无菌毛细吸管、米尺等。 用无菌打孔器在溶壁微球菌琼脂平板上打孔，用针头挑出孔内琼脂，孔径 2mm左右，孔距5-20mm。 用毛细吸管取新鲜搜集的唾液参加琼脂孔内，每孔加一滴，每滴约有 0.025ml,一起加规范溶菌酶作阳性对照。用小米尺或三角板量取小孔周围溶菌环直径，并作记载，可与规范溶菌酶阳性对照作比照调查。如需定量测定检品（唾液）中的溶菌酶含量，可将上述各种稀释度的溶菌酶规范溶液，别离参加小孔中，同法测定溶菌环直径，用半对数纸制成规范曲线，检品中的溶菌酶含量可从规范曲线上查出。 溶壁微球菌琼脂平板的制造：①溶壁微球菌在运用前于琼脂斜面上传代一次，然后接种于一般琼脂平板 ,37C°培育24小时，用1/15mol.LPBS或无菌蒸馏水洗下菌苔，洗刷两次，2000r/min，离心30min，弃上清，称量沉淀物湿重, 用无菌蒸馏水配成100mg/ml的菌液。②称取优质琼脂粉1g参加1/15mol.LPBS 100ml,制成1%琼脂。③取上述菌液1ml, 参加加热消融并放至50-60 C°的琼脂中，摇匀倾泻平板。冷凝后即为溶壁微球菌琼脂平板。